L'EGFR et son variant EGFRvIII activé fenty puma de manière constitutive sont liés à la résistance au glioblastome en thérapie, mais les mécanismes sous-jacents de cette association restent encore flous. Nous rapportons que, dans le glioblastome, EGFR / EGFRvIII co-exprime paradoxalement avec le modulateur de l'apoptose régulé positivement par p53 (PUMA), un membre pro-apoptotique de la famille de protéines Bcl-2 principalement situées sur la mitochondrie.

L'EGFR / EGFRvIII se lie à PUMA de manière constitutive et sous stress apoptotique, puis séquestre le PUMA dans le cytoplasme. L'interaction EGFR-PUMA est indépendante de l'activation de l'EGFR et est maintenue sous inhibition de l'EGFR. Un inhibiteur de Bcl-2 / Bcl-xL qui imite l'activité de PUMA sensibilise puma fenty les cellules de glioblastome exprimant EGFR / EGFRvIII à Iressa.EGFRvIII indépendante de la kinase qui conduit à la résistance aux médicaments antitumoraux.

Bien que ces protéines pro-apoptotiques semblent être fonctionnellement redondantes, leur expression s est avérée spécifique puma suede femme à la tumeur [23] et l un des principaux, PUMA, a récemment montré qu il induisait l apoptose induite par les inhibiteurs de l EGFR dans les cancers de la tête et du cou [ 24]. Bien qu'aucun rôle régulateur direct de EGFR / EGFRvIII dans l'apoptose n'ait été signalé, il a été récemment démontré qu'ErbB4, un membre de la famille des récepteurs tyrosine kinases EGFR.

Cela a été effectué, comme nous l'avons décrit précédemment puma basket [9]. deux matrices de tissus (Imgenex; IMT-01240 et IMT-01241) ont été immunocolorées. Un réseau de tissus (IMT-01255) avait été préalablement coloré pour EGFR / EGFRvIII [9]. L'anticorps monoclonal de souris anti-EGFR utilisé dans l'IHC reconnaît l'extrémité C-terminale de l'EGFR et de l'EGFRvIII. Pour PUMA, nous avons immunomarqué tous les trois réseaux de tissus qui sont composés de 12 tissus cérébraux normaux et de 101 gliomes primaires.

Les coupes de tissus ont été déparaffinées, déshydratées et soumises à une récupération d'antigène dans un tampon contenant de l'EDTA dans un four. L'activité de la peroxydase endogène a été bloquée avec du peroxyde d'hydrogène à 0,3% et les lames ont été incubées avec du sérum de chèvre normal à 10% pendant 30 puma rihanna min, puis avec un anticorps monoclonal de souris anti-EGFR (1:50; Novocastra RTU-EGFR-384) et polyclonal de lapin anti-PUMA. anticorps (1: 100;

Cette opération a été réalisée par fractionnement mitochondrial à l'aide d'un kit d'analyse de Pierce (Rockford, IL), conformément aux instructions du fabricant, pour obtenir des fractions mitochondriales et non mitochondriales. Les deux fractions ont été soumises à une extraction de protéines en utilisant 1% de SDS / 0,1% de NP-40 et à une sonication suivie d'une centrifugation pendant 20 min à 15 000 xg à 4 ° C. Dans ces études, nous avons soumis 25% des protéines mitochondriales et 2,5.