EGFRvIII et de membres pro-apoptotiques de puma a scratch la famille de protéines Bcl-2. Comme le montre la figure 1a, la majorité de ces lignées cellulaires co-expriment des taux élevés d'EGFR et de trois protéines pro-apoptotiques, à savoir PUMA, Bax et Bmf. En revanche, ces cellules expriment de faibles niveaux de Bad, Bim et Bok. Pour déterminer si EGFRvIII coexprimait également avec des protéines pro-apoptotiques similaires à l'EGFR, nous avons examiné trois xénogreffes de GBM portant l'EGFRvIII.

Les résultats (Fig. 1b) ont montré que ces xénogreffes de GBM exprimant EGFRvIII expriment également PUMA, Bax et Bmf. Nous avons également déterminé les niveaux d'expression de PUMA dans les xénogreffes de GBM avec des taux élevés et faibles d'EGFRvIII et les résultats (Fig. S1 dans Données puma a scratch femme supplémentaires) ont montré que la xénogreffe D-317 MG co-exprimait EGFRvIII et PUMA et que les D-320 MG et D-456 Les xénogreffes de MG à expression indétectable d'EGFR / EGFRvIII exprimaient PUMA à des niveaux faible et élevé.

L'a-tubuline a été déterminée puma alexander mcqueen en tant que témoin de charge. Lignées cellulaires: 1, UW14; 2, UW281; 3, MGR1; 4, MGR2; 5, MGR3; 6, T98G; 7, U373MG; 8, UW5; 9, UW15; 10, UW19. Toutes sont des cellules GBM, à l'exception de MGR1 et UW5, qui sont des cellules AA. (B) Co-expression de EGFRvIII et de protéines pro-apoptotiques dans des xénogreffes de GBM. Trois xénogreffes de GBM exprimant EGFRvIII, à savoir, D-270 MG, D-317 MG et U87MG-EGFRvIII, ont été examinées pour déterminer les niveaux de EGFRvIII.

Et puma amg D-317 MG) et avec EGFRvIII transfecté de manière stable . De manière similaire, dans trois lignées de GBM exprimant EGFR, il a été démontré que PUMA co-immunoprécipitait avec EGFR (Fig. 1d). Les IgG n'ont pas donné de signaux indiquant une spécificité d'immunoprécipitation. L'interaction EGFR-PUMA a été confirmée par IP inverse en utilisant un anticorps PUMA (Un rapport précédent avait montré que l'EGFR pouvait exister dans le cytoplasme sous une forme libre non liée à la membrane.

Ensemble, ces résultats indiquent que l'EGFR et l'EGFRvIII coexpriment de manière paradoxale avec des protéines pro-apoptotiques et interagissent spécifiquement avec PUMA dans le GBM humain.En utilisant une cohorte de 101 gliomes et 12 tissus cérébraux normaux, nous avons examiné les taux d'EGFR / EGFRvIII et de PUMA via l'IHC. Les résultats indiquent une corrélation positive significative entre les niveaux d'expression de EGFR / EGFRvIII et puma beige de PUMA (p = 0,039). Comme le montre la figure 2a.

L'anticorps EGFR utilisé dans ces études reconnaissait à la fois l'EGFR et l'EGFRvIII. L'analyse de régression a montré que l'expression de l'EGFR est corrélée de manière significative et positive avec PUMA (p = 0,039, R = 0,9) et que l'EGFR seul, PUMA seul et leur co-expression étaient en corrélation significative et positive avec le degré de gliome (* EGFR / PUMA, p = 0,018 , R = 0,94; ** EGFR, p = 0,00005, R = 1,0; *** PUMA, p = 0,021, R = 0,93). (B) Gliomes primaires immunocolorés représentatifs.